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    91视频香蕉潮黴素B作用機製:  

            潮黴素B是由吸水鏈黴菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素,通過抑製蛋白質合成而殺死細菌、真菌和高等真核細胞。潮黴素B通過幹擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑製蛋白合成。目前常用於篩選和維持培養含潮黴素抗性基因的原核或真核細胞。 
     
    抗性基因: 
    對潮黴素B的抗性源自編碼潮黴素B磷酸轉移酶(Hph)的基因。至今發現兩種來源: 
    Streptomyces hygroscopicus產生的Hph抗性基因;
    Escherichia coli,Klebsiella pneumoniae內質粒攜帶的Hph抗性基因(常用);  
     
    91香蕉APP潮黴素B生物應用: 
    1) 篩選和維持培養穩定轉染Hph 載體的原核細胞或真核細胞(植物細胞和哺乳動物細胞); 
    2)由於作用模式的差異,常與G418 (GeneticinTM),Zeocin™和blasticidin S聯合使用,篩選穩定轉染兩個不同載體的細胞株;
    3)抗病毒劑,由於潮黴素B選擇性滲透進入因為病毒感染增強通透性的細胞,而且具有抑製翻譯的功效;
    4)作為驅蟲藥加入動物飼料; 
    雙抗性穩定轉染細胞篩選的抗生素作用機製及抗性
    抗生素抗性機製抗性基因哺乳動物篩選濃度
    潮黴素B幹擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀Hph200~500μg/mL
    G418幹擾80S核糖體功能和抑製蛋白合成Tn5/Tn601100~1000μg/mL
    Zeocin摻入或者切割DNA引起細胞死亡Sh ble50~100μg/mL
    blasticidin S核糖體上抑製肽鍵形成Bsd/BSD3~50μg/mL

     
    91香蕉APP潮黴素B應用濃度: 
    潮黴素B用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養基,生長條件和細胞代謝率而變化。推薦使用濃度為50-1000 μg/mL,zui佳濃度需要殺滅曲線來確定。 
    哺乳動物細胞·200-500 μg/mL;細菌/植物細胞·100-300 μg/mL;真菌·300-1000μg/mL; 
     
    91香蕉APP潮黴素B產品使用:
    使用一:殺滅曲線確定zui佳殺死濃度(僅作參考,因個人檢測體係而異)
    (1)往組織培養級的96孔板內加入未轉染細胞,細胞密度約50-200細胞/孔;細胞貼壁之後,往每孔加入含不同濃度(如50-1000μg/mL,至少5個濃度)潮黴素B的200μL新鮮培養基;
    (2)37℃,5% CO2培養箱孵育細胞10-14天;
    (3)培養5-7天後更換新的培養液,培養液內含有相應濃度的潮黴素B;
    (4)10-14天後使用細胞增殖方法如MTT,CCK-8等評估細胞活力;也可以通過檢測細胞克隆數或百分比匯合率來確定毒性效應。一般選擇在10-14天能夠殺死所有細胞的zui小濃度為zui佳篩選濃度。
    使用二:篩選穩定轉染細胞
    (1)對於貼壁細胞,直接吸去60mm培養皿內的轉染細胞培養基,然後加入含有潮黴素B的新鮮培養基5-6ml;對於懸浮細胞,無菌條件250x g,離心10min除去舊的轉染細胞培養基,然後懸浮在約5ml的含潮黴素B的新鮮培養基;
    (2) 5-7天後,如上方法更換含有潮黴素B的新鮮培養基;
    (3) 再孵育細胞5-7天;
    (4) 10-14天孵育後,培養體係中隻含有能夠表達潮黴素B抗性表型的活細胞。因此篩選之後如步驟一,更換不含潮黴素B的新鮮培養基。 
     
    應用實例:
    物種細胞係/株質粒/載體篩選濃度
    E.ColiHB101/XL1-Blue/K802pEX-295~950 μM 
    RiceProtoplast pTRA132/pTRA14195~285 μM
    BarleyCallusbinary vector50 μg/mL
    Aspergillus nidulansG191/pDJB3-1pDH25250 ,>1000
    ChickenB cell line DT40N/A1500μg/mL
    HumanHEK293pUHD10-350 μg/mL
    MouseJ1 ESpBS524200 μg/mL
    HumanHMEC-1pCEP-4200 μg/mL
    DrosophilaS2pAc, pCoHygro500 μg/mL

    保存方法:溶液直接存放在2℃~8℃,至少存放1年。

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    主營:生化試劑、抗體、蛋白/多肽、分子生物學、細胞生物學、Elisa試劑盒、發光試劑盒、培養基、細胞、蛇毒試劑、標準品、 標準溶液……
    並代理abcam、Amresco、Axygen、ABI、Bioworld、Corning、CST、GE、invitrogen、Millipore、Roche、R&D、santa、sigma、thermofisher等品牌

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