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  • 了解一下GelRed核酸染料的使用方法吧

  • 點擊次數:18 發布時間:【2021-01-14】
  •   GelRed核酸染料是一種具有凝膠染色特性,並被設計為替換高毒性染色劑-溴化乙錠(EB)的紅色熒光核酸染色劑。
     
      GelRed核酸染料既可用於前染(precast gel staining),也可用於後染(post gel staining)。通常後染比前染能夠獲得更靈敏的特性,並能排除染色劑在電泳過程中對核酸條帶分離造成任何影響的可能性。
     
      然而,前染較後染更為簡單、經濟,因為前染不需要額外的著色過程,並且燃料用量更少。因此,假如靈敏度和條帶清晰度不成問題,前染則是一選。91视频香蕉強烈建議您嚐試兩種染色方法,以便根據您的需要選擇一選的染色方法。
     
      使用方法:
     
      1.膠染法(用法同EB)
     
      (1)製膠時加入GelRed核酸染料(例如:每50mL瓊脂糖溶液中加入5μL GelRed 10,000×儲液,以此比例類推)。
     
      (2)按照常規方法進行電泳。
     
      注意事項:
     
      此方法染色染料用量相對較少,500 μL染料大約可以做100塊50 mL的膠。 由於GelRed具有良好的熱穩定性,可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷卻。
     
      搖晃,振蕩或者翻轉以保證染料充分混勻。也可以選擇將GelRed儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩衝液中,然後用微波爐或其他常用方式加熱以製備瓊脂糖凝膠。
     
      GelRed兼容所有常用的電泳緩衝溶液。 含有染料的預製凝膠溶液可以大量製備,並長期保存直到使用。 此方法不適合預製聚丙烯酰胺凝膠,對於聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。
     
      2.泡染法
     
      (1)按照常規方法進行電泳。
     
      (2)用H2O將GelRed 10,000×儲液稀釋約3,300倍到0.1 M NaCl中,製成3×染色液。(例如將15μL GelRed 10,000×儲液和5 mL 1 M NaCl加到45 mL H2O中)。
     
      (3)將凝膠小心地放入合適的容器中,如聚丙烯容器中,緩慢加入足量的3×染色液浸沒凝膠,室溫振蕩染色30 min左右,染色時間根據凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對於含3.5~10%丙烯酰胺的凝膠,染色時間通常介於30 min到1 h,並隨丙烯酰胺含量增加而延長。
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